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动物体液形态学——学习笔记（1）样本采集与预处理

发布时间：2021-02-01 来源：科宝智慧医疗

前言：体液形态学，包括尿液形态学在内，是小动物医学临床诊断的重要组成部分，也是国内临床兽医师目前较为缺乏与急需的知识技能。本课程系列由兽医病理学专家Dr. Francesco Cian（意大利）以线上课程的方式在VETcpd平台上主讲（https://vetcpd.co.uk/product/fluid-cytology-for-general-practice-od/），并由科宝智慧医疗动物事业部整理为中文学习笔记，供广大临床兽医师参考。Dr. Cian是英国Batt Lab动物第三方临床检测实验室（隶属于德国纳博科临实验室）的主管与细胞学专家，并曾在2018年来华进行细胞学培训巡讲，著作有《兽医细胞学》并被翻译为各种语言版本。

在小动物临床上，膀胱疾病、肾病、胸腹水（例如猫传染性腹膜炎）、脓疱/囊肿都是极为常见的，临床兽医每天都要和各种各样的体液打交道。随着神经学与影像学的发展，脑脊液分析也变得越来越重要。体液的诊断检查包括物理、生化和细胞学诊断，其中细胞学是最重要的检查。细胞学更准确的叫法应是形态学，因为体液中不仅含有细胞，而且还有大量非细胞但具备诊断意义的有形成分。本文我们针对小动物临床上最常见的一些体液，介绍其采集、制片与初步评估的基础知识，还会分享很多实用技巧。最后希望通过这一系列的笔记分享，帮助大家学会有逻辑有步骤地全面分析体液，学会如何从体液中获得尽可能多的信息。

如何收集体腔积液与制片

1. 样本收集

首先对采样部位进行剃毛与消毒。采集体液可以用普通针头（18-22G）直接穿刺，但更建议使用蝴蝶针头/头皮针（butterfly needle）甚至静脉留置针，尤其是采集胸腹腔时，不容易因为动物挣扎而脱落或刺伤内脏。

针头后方最好连接一个三通阀（3-way stop cock），这样可以方便一路抽吸，另一路冲洗，还能在要抽吸大量体液时方便地更换针筒。最后连上用于抽吸液体的针筒，针筒大小根据预估液体量选择。

蝴蝶针头与三通阀管（图片来源于网络）

准备一个EDTA抗凝管、一个空白无菌管与多个干净玻片（需要有磨砂端）。EDTA抗凝管用来做细胞学与细胞计数，如果预期液体中含有大量血液，不使用抗凝剂的话，血液会迅速凝集，并裹挟其他细胞，导致无法制作单层的细胞学涂片。空白无菌管（如血清管、尿液管、PCR管）用来做生化与微生物培养，因为抗凝剂有抑菌作用，EDTA抗凝管中的样本做细菌培养会导致假阴性。所以至少要收集两管样本（一管含抗凝剂，另一管不含），且每个管子中至少要有几毫升液体。如果要做PCR，两个管子里的样本都能用。

特殊技巧

胸腔积液：一定要先做影像，根据影像结果来判断采样位置（例如是单侧还是双侧，积液量是多少等）。动物应俯卧或站立保定，尤其是已有呼吸困难的动物，尽量不要侧卧保定或使用镇定、局麻，这会增加呼吸难度。采样位置一般是胸腔后1/3，第六到第八肋间肋软骨交界处。由于血管和神经贴着肋骨的后缘，为了不伤及它们，针头应该贴着肋骨的前缘进入。

心包积液：动物站位、俯卧位或左侧卧位严格保定，有时甚至需要镇定，以确保不会误伤心脏或胸腔其他器官、血管。进针位置为第六到第八肋间肋软骨交界处。

腹腔积液：侧卧位保定，进针位置为腹中线肚脐后方1-2cm处，可以稍稍靠右侧以避开腹中线镰状脂肪与脾脏。采样前可让动物自行排尿或按摩排尿，排空膀胱以免误穿。

如果非常熟悉进针位置，可以在没有B超引导的情况下进行胸腹腔与膀胱穿刺。

2. 样本处理与玻片制备

样本预处理：

首先观察液体样本，如果透明清澈，可能有形成分数量很少，需要进一步浓缩才能制片；如果浑浊、有颜色、不透明，可能含较多的有形成分（>5000 cc/ul)，可以尝试直接涂片。

浓缩：可采用普通离心（150-350g x 5min – 1000- 1500rpm），细胞离心机（Cytospin）或自然沉降装置。